មគ្គុទ្ទេសក៍វិទ្យាសាស្ត្ររដូវក្តៅ៖ នៅពេលដែលរលកកំដៅ ៤០អង្សាសេ ជួបនឹងការពិសោធន៍ម៉ូលេគុល

សីតុណ្ហភាពខ្ពស់បានបន្តកើតមានពាសពេញប្រទេសចិននាពេលថ្មីៗនេះ។ នៅថ្ងៃទី 24 ខែកក្កដា ក្រុមសង្កេតការណ៍ឧតុនិយមខេត្ត Shandong បានចេញការជូនដំណឹងអំពីសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ពណ៌លឿង ដោយព្យាករណ៍ថា សីតុណ្ហភាព "ដូចសូណា" ពី 35-37 °C (111-133 °F) និងសំណើម 80% សម្រាប់រយៈពេល 4 ថ្ងៃបន្ទាប់នៅក្នុងតំបន់ដីគោក។ សីតុណ្ហភាពនៅកន្លែងដូចជា Turpan, Xinjiang កំពុងឡើងដល់ 48°C (111-133°F)។ ទីក្រុង Wuhan និង Xiaogan ខេត្ត Hubei ស្ថិតក្រោមការប្រកាសអាសន្នពណ៌ទឹកក្រូច ជាមួយនឹងសីតុណ្ហភាពលើសពី 37°C នៅក្នុងតំបន់មួយចំនួន។ នៅក្នុងកំដៅដ៏ក្ដៅគគុកនេះ ពិភពមីក្រូទស្សន៍នៅក្រោមផ្ទៃនៃបំពង់កំពុងជួបប្រទះការរំខានមិនធម្មតា - ស្ថេរភាពនៃអាស៊ីត nucleic សកម្មភាពរបស់អង់ស៊ីម និងស្ថានភាពរូបវន្តនៃសារធាតុ reagents ទាំងអស់ត្រូវបានបង្ខូចទ្រង់ទ្រាយដោយស្ងប់ស្ងាត់ដោយរលកកំដៅ។

ការទាញយកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកបានក្លាយទៅជាការប្រណាំងប្រជែងនឹងពេលវេលា។ នៅពេលដែលសីតុណ្ហភាពខាងក្រៅលើសពី 40 °C សូម្បីតែម៉ាស៊ីនត្រជាក់បើកក៏ដោយ សីតុណ្ហភាពនៃតារាងប្រតិបត្តិការតែងតែឡើងខ្ពស់ជាង 28 °C។ នៅពេលនេះ សំណាក RNA ដែលបន្សល់ទុកនៅចំហរ លឿនជាងពីរដងដូចនៅនិទាឃរដូវ និងរដូវស្លឹកឈើជ្រុះ។ នៅក្នុងការទាញយកអង្កាំម៉ាញេទិក ដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្នត្រូវបានឆ្អែតក្នុងមូលដ្ឋាន ដោយសារតែការពន្លឿនការរលាយនៃសារធាតុរំលាយ ហើយគ្រីស្តាល់ងាយនឹងធ្លាក់ភ្លៀង។ គ្រីស្តាល់ទាំងនេះនឹងបណ្តាលឱ្យមានការប្រែប្រួលដ៏ធំនៅក្នុងប្រសិទ្ធភាពនៃការចាប់យកអាស៊ីត nucleic ។ ភាពប្រែប្រួលនៃសារធាតុរំលាយសរីរាង្គកើនឡើងក្នុងពេលដំណាលគ្នា។ នៅសីតុណ្ហភាព 30°C បរិមាណនៃការប្រែប្រួល chloroform កើនឡើង 40% បើធៀបនឹង 25°C។ ក្នុងអំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ ចាំបាច់ត្រូវធានាថា ល្បឿនខ្យល់នៅក្នុងបំពង់ផ្សែងគឺ 0.5m/s ហើយប្រើស្រោមដៃ nitrile ដើម្បីរក្សាប្រសិទ្ធភាពការពារ។

ការពិសោធន៍ PCR ប្រឈមមុខនឹងការរំខានដល់សីតុណ្ហភាពកាន់តែស្មុគស្មាញ។ សារធាតុ Reagents ដូចជា Taq enzyme និង reverse transcriptase មានភាពរសើបខ្លាំងចំពោះការប្រែប្រួលសីតុណ្ហភាពភ្លាមៗ។ ការកកិតនៅលើជញ្ជាំងបំពង់បន្ទាប់ពីដកចេញពី -20 អង្សារសេអាចបណ្តាលឱ្យបាត់បង់សកម្មភាពអង់ស៊ីមជាង 15% ប្រសិនបើវាចូលទៅក្នុងប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម។ ដំណោះស្រាយ dNTP ក៏អាចបង្ហាញការរិចរិលដែលអាចរកឃើញបន្ទាប់ពីការប៉ះពាល់នឹងសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ត្រឹមតែ 5 នាទី (> 30°C)។ ប្រតិបត្តិការឧបករណ៍ក៏ត្រូវបានរារាំងដោយសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ផងដែរ។ នៅពេលដែលសីតុណ្ហភាពព័ទ្ធជុំវិញបន្ទប់ពិសោធន៍គឺ>35°C ហើយការបោសសំអាតកំដៅនៃឧបករណ៍ PCR គឺមិនគ្រប់គ្រាន់ (<50 សង់ទីម៉ែត្រពីជញ្ជាំង) ភាពខុសគ្នានៃសីតុណ្ហភាពខាងក្នុងអាចឡើងដល់ 0.8°C។ គម្លាតនេះអាចបណ្តាលឱ្យប្រសិទ្ធភាពពង្រីកនៅគែមនៃចានអណ្តូង 96 ធ្លាក់ចុះជាង 40% ។ តម្រងធូលីគួរតែត្រូវបានសម្អាតជាទៀងទាត់ (ការប្រមូលផ្តុំធូលីកាត់បន្ថយប្រសិទ្ធភាពនៃការសាយភាយកំដៅដោយ 50%) ហើយម៉ាស៊ីនត្រជាក់ដោយផ្ទាល់គួរតែត្រូវបានជៀសវាង។ លើសពីនេះ នៅពេលធ្វើការពិសោធន៍ PCR ពេញមួយយប់ ជៀសវាងការប្រើឧបករណ៍ PCR ជា "ទូរទឹកកកបណ្តោះអាសន្ន" ដើម្បីរក្សាទុកគំរូ។ ការផ្ទុកនៅសីតុណ្ហភាព 4°C លើសពី 2 ម៉ោងអាចបណ្តាលឱ្យមាន condensation បន្ទាប់ពីគម្របកំដៅបានបិទ ធ្វើឱ្យប្រព័ន្ធប្រតិកម្មរលាយ និងអាចបំផ្លាញម៉ូឌុលដែករបស់ឧបករណ៍។

ប្រឈមមុខនឹងការព្រមានអំពីសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ជាប់លាប់ មន្ទីរពិសោធន៍ម៉ូលេគុលគួរតែបន្លឺសំឡេងរោទិ៍ផងដែរ។ សំណាក RNA ដ៏មានតម្លៃគួរត្រូវបានរក្សាទុកនៅខាងក្រោយម៉ាស៊ីនបង្កក -80°C ជាមួយនឹងការចូលប្រើបានកំណត់ចំពោះរយៈពេលដែលមានសីតុណ្ហភាពខ្ពស់។ ការបើកទ្វារទូរទឹកកក -20°C ច្រើនជាងប្រាំដងក្នុងមួយថ្ងៃនឹងធ្វើឱ្យការប្រែប្រួលសីតុណ្ហភាពកាន់តែធ្ងន់ធ្ងរ។ គ្រឿងបរិក្ខារដែលបង្កើតកំដៅខ្ពស់ត្រូវការកន្លែងបញ្ចេញកំដៅយ៉ាងតិច 50 សង់ទីម៉ែត្រទាំងសងខាង និងផ្នែកខាងក្រោយ។ លើសពីនេះ វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យរៀបចំរចនាសម្ព័ន្ធពេលវេលាពិសោធន៍ឡើងវិញ៖ 7:00-10:00 AM សម្រាប់ប្រតិបត្តិការដែលងាយនឹងសីតុណ្ហភាពដូចជាការទាញយក RNA និងការផ្ទុក qPCR ។ ពីម៉ោង 1:00-4:00 PM សម្រាប់ការងារដែលមិនមែនជាការពិសោធន៍ ដូចជាការវិភាគទិន្នន័យ។ យុទ្ធសាស្ត្រនេះអាចទប់ស្កាត់ការឡើងកំដៅខ្លាំងដោយប្រសិទ្ធភាពពីការជ្រៀតជ្រែកក្នុងជំហានសំខាន់ៗ។

ការពិសោធន៍ម៉ូលេគុលកំឡុងពេលរលកកំដៅគឺជាការសាកល្បងទាំងបច្ចេកទេស និងការអត់ធ្មត់។ នៅក្រោមព្រះអាទិត្យរដូវក្តៅដែលមិនឈប់ឈរ ប្រហែលជាដល់ពេលដែលត្រូវដាក់បំពង់របស់អ្នក ហើយបន្ថែមប្រអប់ទឹកកកបន្ថែមមួយទៅគំរូរបស់អ្នក ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យឧបករណ៍នេះបញ្ចេញកំដៅកាន់តែច្រើន។ ការគោរពចំពោះការប្រែប្រួលសីតុណ្ហភាពនេះគឺពិតជាគុណភាពមន្ទីរពិសោធន៍ដ៏មានតម្លៃបំផុតក្នុងកំឡុងរដូវក្តៅដ៏ក្ដៅគគុក—បន្ទាប់ពីទាំងអស់នៅក្នុងកំដៅ 40°C នៃរដូវក្តៅ សូម្បីតែម៉ូលេគុលក៏ត្រូវការ "តំបន់ប៉ូលសិប្បនិម្មិត" ដែលត្រូវបានការពារយ៉ាងប្រុងប្រយ័ត្ន។