ការដោះស្រាយបញ្ហាអ្នកវិភាគ PCR៖ សំណួរ និងដំណោះស្រាយដែលសួរញឹកញាប់

ឧបករណ៍វិភាគប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់ Polymerase (PCR) គឺជាឧបករណ៍សំខាន់ក្នុងជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល ដែលអនុញ្ញាតឱ្យអ្នកស្រាវជ្រាវពង្រីក DNA សម្រាប់កម្មវិធីចាប់ពីការស្រាវជ្រាវហ្សែនរហូតដល់ការវិនិច្ឆ័យគ្លីនិក។ ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ ដូចជាឧបករណ៍ស្មុគស្មាញណាមួយ ឧបករណ៍វិភាគ PCR អាចជួបប្រទះបញ្ហាដែលប៉ះពាល់ដល់ដំណើរការរបស់វា។ អត្ថបទនេះដោះស្រាយសំណួរទូទៅមួយចំនួនអំពីឧបករណ៍វិភាគ PCRការដោះស្រាយបញ្ហា និងផ្តល់នូវដំណោះស្រាយជាក់ស្តែងចំពោះបញ្ហាទូទៅ។

1. ហេតុអ្វីបានជាប្រតិកម្ម PCR របស់ខ្ញុំមិនពង្រីក?

បញ្ហាមួយក្នុងចំណោមបញ្ហាទូទៅបំផុតដែលអ្នកប្រើប្រាស់ប្រឈមមុខគឺអសមត្ថភាពនៃប្រតិកម្ម PCR ដើម្បីពង្រីក DNA គោលដៅ។ នេះអាចត្រូវបានកំណត់ដោយកត្តាជាច្រើន៖

ការរចនា primer មិនត្រឹមត្រូវ៖ ត្រូវប្រាកដថា primer របស់អ្នកជាក់លាក់សម្រាប់លំដាប់គោលដៅ និងមានសីតុណ្ហភាពរលាយល្អបំផុត (Tm)។ ប្រើឧបករណ៍ផ្នែកទន់សម្រាប់ការរចនាបឋម ដើម្បីជៀសវាងការចងមិនជាក់លាក់។

DNA គំរូមិនគ្រប់គ្រាន់៖ ផ្ទៀងផ្ទាត់ថាអ្នកកំពុងប្រើចំនួនគំរូ DNA គ្រប់គ្រាន់។ តិចពេកនឹងនាំឱ្យខ្សោយ ឬគ្មានការពង្រីក។

សារធាតុរារាំងក្នុងសំណាក៖ សារធាតុកខ្វក់ក្នុងសំណាកអាចរារាំងប្រតិកម្ម PCR ។ ពិចារណាលើការបន្សុត DNA របស់អ្នក ឬប្រើវិធីស្រង់ចេញផ្សេង។

ដំណោះស្រាយ៖ ពិនិត្យមើលការរចនា primer របស់អ្នក បង្កើនការប្រមូលផ្តុំគំរូ និងត្រូវប្រាកដថាគំរូរបស់អ្នកមិនមានសារធាតុ inhibitors ។

2. ហេតុអ្វីបានជាផលិតផល PCR របស់ខ្ញុំមានទំហំខុស?

ប្រសិនបើទំហំផលិតផល PCR របស់អ្នកមិនដូចការរំពឹងទុក វាអាចបង្ហាញពីបញ្ហាជាមួយនឹងលក្ខខណ្ឌប្រតិកម្ម ឬគ្រឿងផ្សំដែលបានប្រើ។

ការពង្រីកមិនជាក់លាក់៖ វាអាចកើតឡើងប្រសិនបើ primer ភ្ជាប់ទៅនឹងគេហទំព័រដែលមិនមានបំណង។ ពិនិត្យមើលភាពជាក់លាក់នៃ primers ដោយប្រើឧបករណ៍ដូចជា BLAST ។

សីតុណ្ហភាព Annealing មិនត្រឹមត្រូវ៖ ប្រសិនបើសីតុណ្ហភាព annealing ទាបពេក ការចងមិនជាក់លាក់អាចបណ្តាលឱ្យមានលទ្ធផល។ ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃសីតុណ្ហភាព annealing ដោយ gradient PCR ។

ដំណោះស្រាយ៖ បញ្ជាក់ភាពជាក់លាក់នៃ primer និងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពសីតុណ្ហភាព annealing ដើម្បីបង្កើនភាពត្រឹមត្រូវនៃផលិតផល PCR ។

3. ឧបករណ៍វិភាគ PCR របស់ខ្ញុំបង្ហាញសារកំហុស។ តើខ្ញុំគួរធ្វើអ្វី?

សារកំហុសនៅលើឧបករណ៍វិភាគ PCR អាចជាការប្រកាសអាសន្ន ប៉ុន្តែជារឿយៗពួកគេអាចផ្តល់តម្រុយចំពោះបញ្ហាដែលអាចកើតមាន។

បញ្ហានៃការក្រិតតាមខ្នាត៖ ត្រូវប្រាកដថាឧបករណ៍វិភាគ PCR ត្រូវបានក្រិតតាមខ្នាតត្រឹមត្រូវ។ ការត្រួតពិនិត្យការថែទាំ និងការក្រិតតាមខ្នាតជាទៀងទាត់មានសារៈសំខាន់ណាស់ក្នុងការទទួលបានលទ្ធផលត្រឹមត្រូវ។

ក្រុមកម្មវិធី៖ ពេលខ្លះកំហុសកម្មវិធីអាចបង្កបញ្ហា។ ចាប់ផ្ដើមកុំព្យូទ័ររបស់អ្នកឡើងវិញ ហើយពិនិត្យមើលបច្ចុប្បន្នភាពកម្មវិធី។

ដំណោះស្រាយ៖ សូមមើលសៀវភៅណែនាំអ្នកប្រើប្រាស់សម្រាប់លេខកូដកំហុសជាក់លាក់ ហើយធ្វើតាមជំហានដោះស្រាយបញ្ហាដែលបានណែនាំ។ ការថែទាំជាទៀងទាត់អាចការពារបញ្ហាជាច្រើន។

4. ហេតុអ្វីបានជាលទ្ធផលប្រតិកម្ម PCR របស់ខ្ញុំមិនស្របគ្នា?

លទ្ធផល PCR ដែលមិនស្របគ្នាអាចជាការខកចិត្តសម្រាប់ហេតុផលជាច្រើន៖

គុណភាពសារធាតុ Reagent៖ ត្រូវប្រាកដថាសារធាតុ reagents ទាំងអស់ រួមទាំងអង់ស៊ីម buffers និង dNTPs គឺស្រស់ និងមានគុណភាពខ្ពស់។ សារធាតុប្រតិកម្មដែលផុតកំណត់ ឬកខ្វក់អាចបណ្តាលឱ្យមានការប្រែប្រួល។

Thermal Cycler Calibration: ការកំណត់សីតុណ្ហភាពមិនស៊ីសង្វាក់គ្នាអាចប៉ះពាល់ដល់ដំណើរការ PCR ។ ពិនិត្យ​ការ​ក្រិត​របស់​ម៉ាស៊ីន​កម្ដៅ​ជា​ប្រចាំ។

ដំណោះស្រាយ៖ ប្រើសារធាតុប្រតិកម្មដែលមានគុណភាពខ្ពស់ និងធ្វើការក្រិតឧបករណ៍កម្ដៅរបស់អ្នកជាប្រចាំ ដើម្បីធានាបាននូវលទ្ធផលជាប់លាប់។

5. តើធ្វើដូចម្តេចដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពប្រតិកម្ម PCR?

ការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃប្រតិកម្ម PCR អាចនាំទៅរកទិន្នផលខ្ពស់ និងលទ្ធផលដែលអាចទុកចិត្តបានកាន់តែច្រើន។

បង្កើនប្រសិទ្ធភាពលក្ខខណ្ឌប្រតិកម្ម៖ ពិសោធន៍ដោយប្រើកំហាប់ផ្សេងគ្នានៃ primers គំរូ DNA និង MgCl2 ។ ប្រតិកម្ម PCR នីមួយៗអាចទាមទារលក្ខខណ្ឌពិសេសសម្រាប់ដំណើរការល្អបំផុត។

ប្រើអង់ស៊ីមដែលមានភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់៖ ប្រសិនបើភាពត្រឹមត្រូវគឺសំខាន់ សូមពិចារណាប្រើ DNA polymerase ដែលមានភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់ ដើម្បីកាត់បន្ថយកំហុសកំឡុងពេលពង្រីក។

ដំណោះស្រាយ៖ ធ្វើការពិសោធន៍បង្កើនប្រសិទ្ធភាពដើម្បីស្វែងរកលក្ខខណ្ឌល្អបំផុតសម្រាប់ការដំឡើង PCR ជាក់លាក់របស់អ្នក។

សរុបមក

ការដោះស្រាយបញ្ហា កឧបករណ៍វិភាគ PCRអាចជាកិច្ចការដ៏គួរឱ្យភ័យខ្លាចមួយ ប៉ុន្តែការយល់ដឹងអំពីបញ្ហាទូទៅ និងដំណោះស្រាយរបស់ពួកគេអាចបង្កើនបទពិសោធន៍ PCR របស់អ្នកយ៉ាងសំខាន់។ តាមរយៈការដោះស្រាយបញ្ហាទូទៅទាំងនេះ អ្នកស្រាវជ្រាវអាចកែលម្អលទ្ធផល PCR និងធានាបាននូវលទ្ធផលដែលអាចទុកចិត្តបាននៅក្នុងកម្មវិធីជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល។ ការថែទាំជាប្រចាំ ការជ្រើសរើសដោយប្រុងប្រយ័ត្ននូវសារធាតុប្រតិកម្ម និងការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃលក្ខខណ្ឌប្រតិកម្ម គឺជាគន្លឹះនៃការវិភាគ PCR ដ៏ជោគជ័យ។